Хеликобактер пилори — анализ ДНК

Helicobacter pylori, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Выявление Helicobacter pylori (H. pylori), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала.

Хеликобактер [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].

H. pylori, Helicobacter pyloridis, DNA [real-time polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Общая информация об исследовании

H. pylori – это грамотрицательная подвижная бактерия, устойчивая к воздействию соляной кислоты и способная колонизировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Как правило, первичное инфицирование происходит в детстве и протекает бессимптомно, но у некоторых людей с течением времени приводит к развитию серьезных заболеваний. H. pylori обнаруживается в подавляющем большинстве случаев гастрита и язвенной болезни и, кроме того, многократно увеличивает риск развития аденокарциномы и В-клеточной лимфомы желудка. Современная диагностика этих заболеваний невозможна без точной и быстрой идентификации H. pylori.

H. pylori может быть выявлена с помощью нескольких методов. В настоящее время доступны неинвазивные методы диагностики, обладающие преимуществом простоты и безопасности взятия образца для исследования (исследование кала), что имеет особое значение при обследовании пожилых людей, детей, а также в условиях амбулатории.

Helicobacter очень чувствительна к воздействию желчных кислот и пониженного содержания кислорода, поэтому при пассаже химуса через двенадцатиперстную и толстую кишку количество бактерий значительно снижается. Кроме того, активные спиралевидные формы бактерии претерпевают морфологические изменения, обеспечивающие большую устойчивость в неблагоприятных условиях. Результатом этого становится низкая концентрация микроорганизмов и преобладание кокковых форм в кале, что следует учитывать при выборе лабораторного метода исследования этого биоматериала. Среди многих неинвазивных методов особое место занимает исследование с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в кале) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. РТ-ПЦР характеризуется очень высокой чувствительностью (93-95 %), что является преимуществом при анализе кала. В отличие от бактериологического посева, это исследование позволяет выявлять как спиралевидные, так и кокковые (некультивируемые) формы H. pylori. Из-за того что в реакции выявляется ДНК микроорганизма, исследование не применяется для дифференциальной диагностики текущей инфекции или инфекции в анамнезе – результат анализа будет положительным еще некоторое время после полной эрадикации H. pylori, что обусловлено выявлением фрагментов разрушенных ДНК микроорганизма.

На слизистой оболочке желудка могут также присутствовать другие представители рода Helicobacter (H. suis, H. baculiformis). Несмотря на то что их значение в развитии заболеваний ЖКТ еще до конца не установлено, они играют определенную роль при идентификации H. pylori. Так, например, лабораторные исследования, основанные на выявлении общего для всех видов Helicobacter антигена, будут характеризоваться большим числом ложноположительных результатов исследования на H. pylori за счет выявления других видов (как в случае с ELISA). Это практически исключено в исследовании с помощью РТ-ПЦР, так как реакция основана на выявлении специфического для H. pylori фрагмента ДНК.

Диагностика хеликобактериоза у детей представляет определенные трудности. Это связано с невыполнением ребенком дыхательного маневра при использовании уреазного дыхательного теста, а также необходимостью наркоза при использовании инвазивных методов. Исследование кала с помощью РТ-ПЦР является хорошей альтернативой этим методам и поэтому может быть с успехом применено в педиатрической практике.

Высокое содержание неорганических солей (фосфатов, кальция), ферментов ЖКТ, полисахаридов, желчных кислот и солей, растительных волокон, слизи и других компонентов кала может ингибировать РТ-ПЦР, поэтому подготовка к тесту требует должного внимания со стороны пациента и врача. Интерпретация результата анализа проводится с учетом дополнительных лабораторных и инструментальных данных.

Для чего используется исследование?

Для диагностики заболеваний, вызванных H. pylori:

  • атрофического или антрального гастрита;
  • язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на гастрит или язвенную болезнь у детей и пожилых людей.
  • При невозможности использования инвазивных методов идентификации H. pylori у пациентов любого возраста.
Читайте также:  Способы борьбы с метеочувствительностью Проявления метеозависимости

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

  • текущая H. pylori-инфекция;
  • H. pylori-инфекция в анамнезе.
  • отсутствие H. pylori-инфекции.

Что может влиять на результат?

  • Присутствие в образце кала крови, желчи, избытка неорганических солей и других компонентов может приводить к получению ложноотрицательного результата.
  • Лечение препаратами тетрациклина, пенициллина (аминопенициллины), макролидами (кларитромицин, азитромицин) и метронидазолом может приводить к получению ложноотрицательного результата.



  • Исследование не позволяет дифференцировать текущую H. pylori-инфекцию и инфекцию в анамнезе.
  • Helicobacter pylori, IgA (количественно)
  • Helicobacter pylori, IgG (количественно)
  • Helicobacter pylori, антиген
  • Гастрин
  • Пепсиноген I
  • Пепсиноген II
  • Антитела к париетальным (обкладочным) клеткам желудка
  • Лабораторное обследование — гастрит и язвенная болезнь желудка
  • Лабораторная диагностика и мониторинг атрофического гастрита и язвенной болезни
  • Анализ кала на скрытую кровь
  • Копрограмма

Кто назначает исследование?

Гастроэнтеролог, педиатр, врач общей практики.

Литература

  • Tahereh Falsafi, Raha Favaedi, Fatemeh Mahjoub, and Mehri Najafi. Application of Stool-PCR test for diagnosis of Helicobacter pylori infection in children.
  • Kabir S. Detection of Helicobacter pylori DNA in feces and saliva by polymerase chain reaction: a review. Helicobacter. 2004 Apr;9(2):115-23. Review.
  • Sen N, Yilmaz O, Simsek I, Küpelioglu AA, Ellidokuz H. Detection of Helicobacter pylori DNA by a simple stool PCR method in adult dyspeptic patients. Helicobacter. 2005 Aug;10(4):353-9.
  • Monteiro L, Gras N, Vidal R, Cabrita J, Mégraud F. Detection of Helicobacter pylori DNA in human feces by PCR: DNA stability and removal ofinhibitors. J Microbiol Methods. 2001 Jun;45(2):89-94.

Как сдавать анализ кала на хеликобактер пилори. Рекомендации доктора

Хеликобактер пилори относится к числу самых опасных для человека бактерий. Патогенный микроорганизм способен провоцировать серьезные отклонения в функциональном состоянии пищеварительного тракта и организма в целом. Бактерии данного типа отличаются повышенной устойчивостью к многочисленным факторам.

Результат терапии напрямую зависит от правильно составленной схемы лечения. Для определения чувствительности микроорганизмов к определенным видам антибактериальных препаратов используются специальные анализы каловых масс. Каждая методика имеет свои достоинства и недостатки. Для получения точных результатов рекомендуется провести несколько тестов.

1. Кому рекомендуется проверить анализ кала на хеликобактерию?

Хеликобактер пилори длительное время присутствует в организме бессимптомно. Признаки нарушения функционального состояния желудочно-кишечного тракта проявляются только при активной жизнедеятельности бактерий. Одним из основных провоцирующих факторов является снижение иммунитета.

При наличии у пациента определенных заболеваний или отдельных симптомов процедура анализа на хеликобактериоз становится обязательной.

Показания к анализу:

  • проведение антибактериальной терапии (для контроля результатов лечения);
  • эрозии и язвы двенадцатиперстной кишки или желудка;
  • симптомы нарушения функционального состояния пищеварительного тракта (регулярные запоры или диарея, метеоризм, болевые ощущения различной локализации);
  • генетическая предрасположенность к заболеваниям, провоцируемым хеликобактер пилори (злокачественные опухоли органов пищеварения, хронические патологии пищеварительного тракта);
  • прогрессирующая атрофия слизистых оболочек желудка;
  • регулярные болевые ощущения в желудке после употребления пищи;
  • железодефицитная анемия;
  • резкое снижение массы тела в сочетании с другими симптомами отклонений в функциональном состоянии пищеварительного тракта;
  • наличие крови в рвотных или каловых массах;
  • выявленные новообразования и полипы в пищеварительной системе;
  • язва пищевода или гастроэзофагеальный рефлюкс.

Рекомендуем посмотреть видео:

2. Как правильно сдавать анализ?

Проведение процедуры исследования каловых масс на наличие патогенных бактерий подразумевает соблюдение ярда правил. Если подготовка к анализу или сбор биологического материала будут совершены неправильно, то результаты тестов могут показать ложный результат. Каловые массы имеют определенный срок хранения. Если материал будет доставлен в лабораторию с нарушением сроков, то тестирование также может стать недостоверным.

Подготовка к сдаче анализа

Подготовительные меры для анализа кала на хеликобактер пилори включают в себя рекомендации по соблюдению определенного режима питания, а также корректировку медикаментозной терапии (при ее наличии). Если прием назначенных препаратов временно прекратить не получается, то данный нюанс обязательно сообщается врачу.

Вещества, содержащиеся в антибиотиках и других категориях медикаментов, могут стать причиной неправильной расшифровки данных исследования.

Рекомендации:

  • за несколько дней до процедуры следует прекратить прием слабительных или антацидных средств;
  • в течение месяца до проведения теста пациент не должен принимать антибактериальные препараты;
  • нельзя в течение нескольких дней употреблять продукты с содержанием грубой клетчатки (свекла, капуста, редис, редька);
  • в течение трех дней до процедуры из рациона исключаются крепкий чай, кофе, острые специи и приправы, овощи и фрукты красного или оранжевого цвета);
  • блюда в течение трех дней перед анализом рекомендуется готовить только методами варки, тушения или паровой обработки;
  • несколько дней нельзя употреблять алкогольные напитки.

Подготовка тары

Стерильную емкость для сбора биологического материала можно приобрести в аптеке. При покупке такой баночки исключается наличие загрязнений. В качестве альтернативы можно использовать другие варианты тар (например, емкости от детского питания). Важным нюансом является их стерильность. Емкости должны быть максимально очищены от любых видов загрязнений.

Читайте также:  В чем опасность папиллом и почему от жировиков на веках нельзя избавляться в домашних условиях

Сбор материала

Запрещено собирать каловые массы с памперса или из унитаза. Идеальным вариантом является забор биологического материала из горшка или с полиэтиленового пакета. Емкость для хранения кала должна быть заполнена на одну третью часть. К таре обязательно прикрепляется заполненное направление.

Как и сколько можно хранить материал?

Емкость с каловыми массами доставляется в лабораторию как можно быстрее. Если возможность быстро направить материал для анализа отсутствует, можно воспользоваться двумя вариантами хранения. В первом случае каловые массы однократно замораживаются. Во втором — хранятся не более двух суток при температуре не выше 4 градусов.

3. Тактика определения бактерии хеликобактер с помощью анализа кала

Назначением конкретного анализа на хеликобактериоз занимается врач. Специалист учитывает индивидуальную клиническую картину состояния здоровья пациента. Сдать анализы на хеликтобактериоз можно самостоятельно, если возникают подозрения на функциональное отклонение пищеварительного тракта.

Молекулярная диагностика

При молекулярном анализе выявляется специфическая ДНК бактерии. Код дублируется на специальном аппарате. При достижении бактерией нужного размера, ее сравнивают с этанолом. Если части ДНК совпадают с оригиналом, то результат теста положительный (хеликтобактериоз выявлен). Методика отличается высокой степенью информативности.

Культуральный анализ

Бактериальный посев (или культуральный анализ) относится к категории микробиологических методов исследований. В процессе поведения процедуры биологический материал помещается в среду, которая является максимально благоприятной для размножения патогенных микроорганизмов. Через неделю каловые массы изучаются с помощью микроскопа.

Для идентификации хеликобактер пилори учитываются окраска бактерий и их способности вступать в определенные реакции.

Особенности методики:

  • процедура позволяет выявить патологический антиген;
  • в процессе изучения биологического материала проводится тест на чувствительность к антибактериальным препаратам;
  • результаты исследования позволяют подобрать максимально эффективную схему терапии.

Определение антигена хеликобактер пилори в кале иммунологическим методом

Главной целью проведения иммунологических тестов при выявлении хеликобактер пилори является определение комплексов антиген + антитело. Для исследования используются помеченные антитела. Вступая в реакцию с калом, такие вещества подвергаются определенным изменениям. Антитела способны определить наличие в каловых массах не только патогенные бактерии, но и их части, а также продукты жизнедеятельности.

Достоинства и недостатки ПЦР-диагностики

ПЦР-диагностика имеет ряд достоинств и недостатков. Некоторые виды патогенных бактерий можно выявить только с помощью данной методики (например, цитотоксичные типы микроорганизмов). Сбор материала для анализа не подразумевает причинение боли или дискомфорта пациенту. Процедура показывает максимально достоверные результаты.

Преимущества методики:

  • процедура позволяет выявить различные штаммы патогенных бактерий;
  • метод отличается высокой степенью чувствительности;
  • анализ безопасен для пациента (для сбора материала не применяются медицинские инструменты);
  • неинвазивность и простота процесса забора биологического материала;
  • высокая степень специфичности теста;
  • метод позволяет определить не только спиралевидные, но и кокковые типы бактерий.

Высокая степень чувствительности теста является его одновременным достоинством и недостатком. Анализ с точностью определяет наличие бактерий, но при загрязнениях биологического материала или тары, результаты процедуры могут быть ложноположительными.

Для исключения ложных показателей следует соблюдать все правила сбора каловых масс для проведения их исследования.

Другие недостатки:

  • относительно высокая цена процедуры;
  • отсутствие возможности определить чувствительность бактерии к антибактериальным препаратам;
  • более низкий показатель чувствительности в сравнении с процедурой исследования биоптата слизистой оболочки желудка.

Анализ кала на антиген хеликобактер пилори инвитро

Процедуры исследования каловых масс осуществляются вне организма пациента («ин витро» — «в стекле», «в пробирке»). Для обнаружения микроба такие методы являются максимально точными и эффективными. Однако процедуры имеют некоторые недостатки. Некоторые процессы, происходящие в человеческом организме нельзя воссоздать искусственным способом.

Анализы могут показать уровень чувствительности бактерий к определенным антибиотикам, но стопроцентной информативности такие тесты не дают.

4. Расшифровка результатов

Уровень достоверности результатов

Расшифровка результатов исследования

Положительный — выявлен хеликтобактериоз; отрицательный — не выявлено ни одного типа хеликобактер пилори

Бактериологический анализ на чувствительность к антибактериальным препаратам

Низкая — на выявление антигена

Высокая — на определение чувствительности

Количество бактерий 0 — результат отрицательный, бактерии не выявлены; показатели больше 0 — определен хеликтобактериоз; R — устойчивость к определенному антибиотику; I — умеренная степень чувствительности к антибиотику; S — высокая степень чувствительности к антибиотику

Положительный — выявлен хеликтобактериоз; отрицательный — патогенная бактерия не выявлена

5. Итоги

  • существует несколько способов определения хеликобактерии в каловых массах лабораторным методом;
  • каждый вариант анализов имеет свои достоинства и недостатки;
  • для получения максимально точных результатов рекомендуется сдать несколько анализов разных типов;
  • каловые массы для анализа собираются с учетом ряда правил;
  • за несколько дней до процедуры из рациона исключается грубая клетчатка, жареные, жирные блюда, острые специи и приправы, алкоголь и любые плоды оранжевого или красного цвета;
  • емкость для кала должна быть стерильной (оптимальный вариант — аптечные тары).
Читайте также:  Цикл лекций (основные положения) «физиология и патология системы органов внешнего дыхания, транспорт

Видео на тему: Чем опасна бактерия Хеликобактер Пилори?

Анализ кала на хеликобактер пилори

Тип бактерий хеликобактер пилори способен вызывать многие из заболеваний, поражающих органы пищеварения, в том числе и язвенную болезнь.

До недавнего времени существование данного микроорганизма и его влияние на здоровье человека вызывало у многих медиков большие сомнения. Теперь то, что язвенная болезнь может возникнуть, как и любое инфекционное заболевание, является доказанным фактом.

Бактерия хеликобактер пилори устойчива ко многим видам воздействия, хорошо сохраняется при неблагоприятных условиях окружающей среды, что позволяет ей активно размножаться на слизистой желудка.

Что показывает анализ

Анализ на хеликобактер пилори помогает выявить присутствие патогенного микроорганизма в организме, так как она может в течение долгого времени никак не проявлять себя.

Появление первых симптомов патологии начинается после снижения уровня иммунитета. После ее выделения и посева появляется возможность подобрать препараты, способные остановить рост и развитие данного микроорганизма.

Показания к анализу

Анализ кала на хеликобактер пилори назначают, если у пациента появляются следующие виды симптомов:

  • Боли в верхней части живота, особенно сразу после употребления пищи.
  • Частая тошнота и рвота.
  • Ощущение переполненного желудка при употреблении небольшого по объему количества пищи.
  • Изжога.
  • Проблемы с глотанием во время приема пищи.
  • Изменение цвета кала до почернения.
  • Наличия железодефицитной анемии, на фоне изменений со стороны желудочно-кишечного тракта.
  • Метеоризм.
  • Появление крови в рвотных массах или в кале.

Анализ кала на хеликобактер пилори обязательно проводится при уже установленном наличии язв в желудке и двенадцатиперстной кишке. Также проверку на носительство проходят пациенты с раковыми опухолями в органах пищеварения при выявлении железодефицитной анемии.

Поводом для обследования может стать семейная предрасположенность к заболеваниям желудочно-кишечного тракта, особенно если у родителей были язвенные поражения желудка и двенадцатиперстной кишки.

Анализ кала назначают при значительных атрофических изменениях слизистой желудка и при наличии полипов в желудке и кишечнике.

Подготовка к процедуре

Анализ кала на хеликобактер пилори требует определенной подготовки.

  • Анализ кала в этом случае можно сдавать только через месяц после последнего приема антибиотиков.
  • За семьдесят два часа до забора материала нельзя употреблять в пищу продукты, окрашивающие кал. К ним относят чай,кофе, фрукты и овощи красных и оранжевых цветов, куркуму, карри, соевый соус.
  • При подготовке к исследованию нельзя употреблять продукты, усиливающие перистальтику кишечника. К ним относят блюда из капусты, редьки, редиса, отрубей, свеклы, а также перловую кашу.
  • Нельзя принимать препараты, влияющие на работу кишечника.
  • Нельзя употреблять алкогольные напитки и энергетики.
  • За три дня до обследования желательно уменьшить объемы потребляемых мяса и рыбы.
  • Материал для исследования желательно собирать в специальную емкость, которую приобретают в аптеке. Образец кала должен быть плотно закрыт.
  • Во время сбора кала, на него не должна попасть моча и вода.
  • Допускается хранение собранного материала в холодильнике, но в течение короткого времени.

К контейнеру при предоставлении материала в лабораторию должно прилагаться специальное направление с указанием данных пациента.

Исказить полученный результат может прием антибиотиков, которые неизбежно повлияют на флору кишечника. При попадании микробов и вирусов извне список имеющихся в кишечнике бактерий может измениться.

Как проводится анализ

Анализ имеет смысл проводить в течение недели после появления первых симптомов заболевания, дальше концентрация микроорганизмов в кале значительно уменьшиться и обнаружить их будет сложно.

Необходимый результат, выявить хеликобактером можно одним из трех способов:

  • ПЦР.
  • Бакпосев.
  • ИФА (проводится параллельно, изучается кровь).

В анализе кала ищут антиген к хеликобактер пилори или остатки частей ДНК. Для этого в лаборатории имеется контрольный образец генетического кода бактерии, специальный прибор ищет подобные частицы в предоставленном для исследования материале.

Нормы и расшифровка результата

Выявляемость возбудителя при анализе кала составляет около 95%.

Если в ходе исследования обнаружено наличие структур аналогичным в имеющемся образце, говорят о том, что результат теста — положительный. В этом случае полученный результат имеет высокую степень точности.

При бактериальном посеве выделенный микроорганизм помещают в питательную среду и ждут увеличения колонии. Примерно через неделю, полученный образец сравнивают с эталонным.

Для определения хеликобактер пилори также используется ее способность окрашиваться при взаимодействии с определенными реагентами. При обнаружении бактерии определяются препараты способные остановить ее рост и размножение.

Ссылка на основную публикацию
Фуцикорт купить в Москве, цена от руб в интернет аптеке Надежда-Фарм
Фуцикорт Лео Лэбораторис Лимитед Инструкция по применению Немного фактов Крем Фуцикорт оказывает результативное действие как при подавлении реакций иммунитета на...
ФТОРОТАН — Большая Медицинская Энциклопедия
ФТОРОТАН ФТОРОТАН (Phthorothanum; син.: Fluothane, Ftorotan, Halothane, Наlothanum, Narcotan и др.; ГФХ сп. Б) — средство для ингаляционного наркоза. 1,1,1-Трифтор-2-хлор-2-бромэтан;...
Фторхинолоны Препараты группы фторхинолонов
Антибиотики фторхинолонового ряда названия 12 мая 2016г. Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США (FDA) выступило с...
Хайлайтер и консилер — в чем разница 28 фото что это такое, чем отличается от консилера
Чем отличается консилер от хайлайтера? Один из вечных вопросов, ответ на который по-прежнему знают не все. Запоминаем простую формулу: первый...
Adblock detector